Cette méthode consiste à ensemencer 5 tubes contenant un milieu spécifique pour les coliformes totaux et un milieu différentiel pour E. coli, puis à incuber les tubes à différentes températures. Le nombre de tubes positifs est ensuite utilisé pour déterminer le nombre de bactéries présentes dans l'échantillon à l'aide de tables de correspondance. Les colonies E. coli sont ensuite confirmées par inoculation d'un milieu spécifique et d'un milieu différentiel.